抑制性消减杂交（SSH)文库构建

一、技术介绍

众所周知，生物体各种生命活动形式都和基因的时空表达差异相关，通过比较同种组织、脏器在不同生理状态下或在不同生长发育阶段的基因表达差异,可为解析生命活动过程提供重要信息。目前已经有很多分子生物学技术可用于研究基因表达差异，其中Diatchenko L等1996年建立的抑制性消减杂交法( Suppression Subtractive hybridization, SSH)以其假阳性率低、灵敏度高、低背景、重复性强和检测范围广等优点迅速得到广泛应用，已成功用于不同细胞株、不同器官组织、个体不同发育阶段以及机体在外界因子作用下差异表达基因，研究对象涉及细菌、病毒、细胞、动物、植物和人类等。国内近几年来应用SSH技术开展的研究也非常活跃，涉及领域相当广泛。

　　SSH技术基本原理：SSH技术利用抑制性PCR能选择性扩增不同丰度差异基因和cDNA 消减杂交特点,运用杂交二级动力学原理（即高丰度序列退火时产生同源杂交的速度大于低丰度序列）,使原本不同丰度的DNA序列相对含量趋于一致。然后利用抑制性PCR特点,两端接上同一接头的非目的基因片段由于具有反向重复序列,在退火时容易形成发夹互补结构,在PCR中不能作为模板与引物配对扩增,从而选择性扩增目的基因而抑制非目的基因片段扩增。消减杂交扣除了实验组和对照组之间同源序列,再结合抑制性PCR的动力学富集,实现高效分离低丰度特异性非同源片段。如下图：

二、技术用途

我们可以利用这种有效的技术来比较两个mRNA群体，并获得只在一个群体中过量表达或特异性表达的基因的cDNA。

我公司采用Clontech公司 PCR-SelectTM cDNA Subtraction Kit构建差减文库，操作精准、经验丰富，已完成上百个SSH文库的构建（包括植物组织、动物组织、临床样本、微生物等各种样本）

三、交付结果

我们的SSH消减文库，交付的产品如下：

四、服务时间

25个工作日内。

五、材料要求

客户构建指定的酵母双杂交cDNA文库，由客户提供组织、细胞或总RNA给我们即可：
 细胞样本：细胞数量大于1*10^7 
 动物样本：大于1g 
 植物样本：大于2g 
 总RNA：大于200ug 
  
六、客户案例

目前我们已经成功完成2000多个的文库构建，主要客户为中国科学院上海植物生理生态研究所、上海交通大学、浙江大学、浙江省农科院、山东省农科院等多家单位完成酵母双（单）杂交文库构建服务，物种包括人、小鼠、大鼠、水稻、拟南芥、牡丹、稻飞虱、苹果、油菜、小麦、贝壳、葡萄、真菌等。