一、普通全长cDNA文库构建

1. 服务流程

1.1  客户样品QC，Total RNA的提取。
1.2  mRNA的分离。
1.3  采用CAP Trapper法进行全长mRNA的富集。
1.4  以mRNA为模板进行cDNA双链的合成。
1.5  对合成的cDNA双链进行分级纯化。
1.6  将分级纯化的cDNA与载体进行all-direct重组反应。
1.7  将重组产物转化DH10B感受态细胞。
1.8  cDNA文库的QC。
   a)  检测文库库容量。
   b) 每个文库随机挑取32个克隆子，PCR检测检测平均插入片段大小，阳性率。
   c)  随机挑取24个克隆进行正向测序，通过NCBI的BLSTAX分析全长率。

2.送样要求

   2.1  针对每个文库，客户需提供至少能提取500ug总RNA的样本，或者至少500ug的总RNA。

3.发货内容

   3.1  我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液（含20%甘油的LB培养基），随机克隆子的PCR鉴定图谱，24个克隆正向测序报告，文库构建报告。

4.质量标准

   4.1  文库库容量：大于1*10^6 CFU。
   4.2  平均插入片段：大于1.2Kbp。
   4.3   阳性率：大于95%。
   4.4   全长率：大于65%。
   4.5   我们构建的文库相对于市场上的其他文库构建方法具有以下优势：
     1）我们从mRNA为模板直接进行cDNA双链的合成，没有经过任何扩增的过程,保证了文库的质量和忠实性。
     2）使用了目前市场上高质量的反转录酶(Superscrip III)，保证文库的片段长度。
     3）使用重组的方法，不经过任何的酶切过程，不用担心cDNA被切断而影响文库质量，重组效率较酶切连接高很多，可以大大提高原始文库的库容量。

5.服务时间

25个工作日内
 
二、高全长比例全长cDNA文库构建

1. 服务流程

1.1  客户样品QC，Total RNA的提取。
1.2  mRNA的分离。
1.3  使用特殊的抗体进行全长mRNA的富集。
1.4  以mRNA为模板进行cDNA双链的合成。
1.5  对合成的cDNA双链进行分级纯化。
1.6  将分级纯化的cDNA与载体进行all-direct重组反应。
1.7  将重组产物转化DH10B感受态细胞。
1.8  cDNA文库的QC。
   a) 检测文库库容量。
   b) 每个文库随机挑取32个克隆子，PCR检测检测平均插入片段大小，阳性率。
   c) 随机挑取24个克隆进行正向测序，通过NCBI的BLSTAX分析全长率。

2.送样要求

   2.1  针对每个文库，客户需提供至少能提取500ug总RNA的样本，或者至少500ug的总RNA。

3.发货内容

   3.1  我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液（含20%甘油的LB培养基），随机克隆子的PCR鉴定图谱，24个克隆正向测序报告，文库构建报告。

4.质量标准

   4.1  文库库容量：大于1*10^6 CFU。
   4.2  平均插入片段：大于1.2Kbp。
   4.3  阳性率：大于95%。
   4.4  全长率：大于85%。
   4.5  我们构建的文库相对于市场上的其他文库构建方法具有以下优势：
     1）我们从mRNA为模板直接进行cDNA双链的合成，没有经过任何扩增的过程,保证了文库的质量和忠实性。
     2）使用了目前市场上高质量的反转录酶(Superscrip III)，保证文库的片段长度。
     3）使用重组的方法，不经过任何的酶切过程，不用担心cDNA被切断而影响文库质量，重组效率较酶切连接高很多，可以大大提高原始文库的库容量。

5.服务时间

35个工作日内