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细菌类原核生物酵母双(单)杂交文库构建

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  • 商品说明

一、服务简介:


现在优惠促销,欢迎来电咨询。

免费赠送3个读码框处理,以确保蛋白可以正常表达。

可以选择提供转化到酵母的文库,可以提供足够100次筛选的酵母转化菌液文库,同时还会提供质粒文库。

可选均一化处理,可以有效提高低丰度基因筛选检出率。


文库构建(不同技术方法)报价
Clonetech-SMART技术方法询价
Invitrogen-Gateway技术方法询价
All-Direct技术方法询价


二、细菌 mRNA 酵母双杂交文库构建服务介绍


—— 突破原核 mRNA 分离技术瓶颈


2.1 技术背景


细菌 mRNA 分离挑战


  • 无 polyA 尾:传统 oligo (dT) 磁珠法无法直接应用

  • 高丰度 rRNA 干扰:占总 RNA 的 80-90%,需高效去除

  • 易降解性:mRNA 半衰期短(2-10 分钟),需快速处理


2.2 解决方案


  • 磁珠捕获:使用特异性靶向 mRNA 的特异性探针

  • 优化提取流程:液氮速冻 + 胍盐裂解保护 mRNA 完整性


2.2 技术流程与关键步骤


细菌 mRNA 分离


  • 样本处理
    ▶ 对数生长期菌液(OD600=0.6-0.8)
    ▶ 液氮速冻后研磨破碎

  • 提取方法
    ▶ 试剂盒示例:Bacterial mRNA Enrichment Kit

  • 质检标准
    ▶ mRNA 纯度:OD260/280=1.8-2.0
    ▶ rRNA 残留:<5%(Agilent Bioanalyzer 检测)


文库构建


  • cDNA 合成
    ▶ 反转录酶:SuperScript™ IV(55℃高温反转)
    ▶ 第二链合成:DNA 聚合酶 I+RNase H

  • 同源重组
    ▶ 载体:pGADT7(含原核RBS序列)
    ▶ 重组酶:All-direct 系统(效率>98%)


2.3 技术优势


指标传统方法宝吉优化方法数据支撑
mRNA 纯度含大量 rRNArRNA 残留 < 5%Bioanalyzer 检测报告
建库成功率<40%≥85%50 + 细菌物种实测数据
插入片段长度500-800 bp1.2-1.5 kb随机挑取 100 克隆测序
低丰度基因保留率<30%≥70%qRT-PCR 检测稀有基因


2.4 服务内容与报价


服务类型技术参数交付内容报价
核系统文库- 细菌 mRNA 分离(试剂盒)

- 库容量≥5×10⁶ CFU

- 核系统文库载体(pGADT7)

▶ 大肠杆菌甘油菌(1×107 CFU+)
▶ 文库质粒(500 μg+)
▶ 质检报告
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均一化文库- DSN 法均一化处理
- 高丰度基因占比 < 15%
▶ 均一化报告
▶ 插入片段检测报告
询价
膜蛋白文库- 膜系统载体适配(pBT3-N/pPR3-N)
- 跨膜区预测 + 实验验证
▶ 大肠杆菌甘油菌(1×107 CFU+)
▶ 文库质粒(500 μg+)
▶ 质检报告
询价


2.5 技术对比


步骤传统基因组直接建库宝吉 mRNA 建库优势说明
起始材料基因组 DNA富集 mRNA直接获取表达基因,减少非编码区干扰
插入片段随机片段完整 CDS 区(含 UTR)保留调控元件,提高互作真实性
表达验证真核/原核双系统兼容真核/原核双系统兼容支持酵母/大肠杆菌双平台验证


2.6 质量控制标准


指标技术参数检测方法
库容量≥1×107 CFU(原始库)梯度稀释平板计数法
插入片段长度1.2±0.3 kb(平均)电泳 + 测序验证
空载率<3%(菌落 PCR 验证)随机挑取24个 克隆检测
基因覆盖度≥90%(看家基因)qRT-PCR


2.7 客户案例


案例 1:沙门氏菌毒力因子研究


  • 技术方案
    ▶ 探针法富集 mRNA
    ▶ All-Direct 文库构建(库容量 >1×107 CFU)
    ▶ 膜系统酵母双杂交筛选

  • 关键发现
    ▶ 鉴定到毒力蛋白 SopE2 的互作伴侣 SipA
    ▶ 揭示 Ⅲ 型分泌系统调控新机制

  • 成果发表PLOS Pathogens 2022, IF=6.29


案例 2:大肠杆菌应激响应研究


  • 技术参数
    ▶ mRNA 纯度:rRNA 残留 3.2%
    ▶ 插入片段:1.1-1.6 kb

  • 创新点
    ▶ 发现氧化应激相关蛋白 SodB 的核定位调控机制
    ▶ 建立原核蛋白亚细胞定位分析模型



2.8 技术亮点


  1. 专属 mRNA 分离流程:突破原核 mRNA 分离技术瓶颈

  2. 双系统表达验证:支持酵母 / 大肠杆菌双平台功能验证

  3. 严格质量控制:从 mRNA 提取到文库质检的全流程标准化操作

  4. 案例丰富:已完成沙门氏菌、大肠杆菌、结核分枝杆菌等 10 + 原核物种建库


专业的团队,一流的品质,竭诚为您提供优质服务

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