HiScript®III Reverse Transcriptase
更高效的第三代反转录酶（逆转录酶），更高的反应温度有助于打开RNA的二级结构，更高的反应效率，质量同Superscript III反转录酶。
| 货号 | 规格 | 价格 |
| HKR2305-01 | 10000U(200U/ul) | 2000.00元 |
广泛的模板兼容性：可兼容动物、植物、细胞、病毒等多种模板
超强的杂质耐受度：对于常见杂质（乙醇、异丙醇、水平衡酚、腐殖酸）均具有超强的耐受度
卓越的逆转录效率：逆转率效率等同于国际著名公司的Superscript III反转录酶，承诺质量完全一致，可以直接替代。
以1μg HeLa细胞RNA为模板，按照说明书推荐体系进行反转录，以1μl cDNA为模板，用PCR进行长片段扩增，将得到的产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果如图所示：扩增条带单一且产量高
长片段扩增电泳图
HiScript® III Reverse Transcriptase对于复杂二级结构的RNA，推荐的反应温度为50~55℃，对于存在复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至60~65℃，避免RNA复杂二级结构对cDNA合成的抑制，可有效合成高质量的cDNA。本产品可以合成长达12Kbp的cDNA，除此之外，本产品仍具有优越的持续合成能力和超强的杂质耐受度。
| 组分 | HKR2305-01 (10000 U) |
| 5 × HiScript®III Buffer | 500 μl |
| HiScript®III Reverse Transcriptase (200 U/μl) | 50 μl |
- 30℃~- 15℃保存
附件：实验操作步骤
第一链cDNA合成
1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）
组分 | 使用量 |
Rnase free ddH2O | to 12μL |
Oligo(dT)18 (50 μM) | 1 μL |
Or Random Primers (50 μM) | or 1μL |
Or Gene Specific Primers (2 μM) | or 1μL |
Total RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng |
dNTP mix | 1μL |
65℃加热5 min，迅速置于室温2 min。简短离心收集反应液后，加入下表中的逆转录反应液，并轻轻吹打混匀。
2. 逆转录反应体系配制（20μL体系）
组分 | 使用量 |
上一步的反应液 | 12μL |
5× HiScript Buffer | 4μL |
DTT | 2μL |
HiScript®III Reverse Transcriptase(200 U/μL) | 1 μL |
RNase inhibitor (40 U/μL) | 1 μL |
3. 逆转录程序设置
温度 | 时间 |
25℃(可选) | 5 min |
50℃-55℃ | 15-50 min |
85℃(可选) | 5 min |
【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo(dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
2）逆转录温度：推荐使用50-55℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至60-65℃。
3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活，对于后续需要进行其他实验的，比如二链合成等，此步骤需要省略。
※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
