酵母展示纳米抗体筛选平台

—— 基于真核表达系统的高通量抗体发现技术

一、技术原理

1. 核心机制

• 载体构建：VHH 基因与 Aga2p 锚定蛋白融合，形成分泌型表达载体

• 表面展示：通过酵母分泌途径将 VHH-Aga2p 复合体锚定在细胞壁

• 筛选分选：荧光标记抗原与酵母表面 VHH 结合，通过 FACS 富集高亲和力克隆

二、技术优势

三、服务内容与流程

       1.1 文库构建

• 来源：天然骆驼 / 羊驼 B 细胞或合成多样性文库

• 库容量：1×10⁷-5×10⁷克隆（随机突变 + CDR 区优化）

1.2 酵母转化与展示

• 转化效率：≥1×10⁶ CFU/μg DNA

• 表面展示率：≥90%（流式检测）

1.3 多轮筛选

• 抗原浓度梯度：100 nM→10 pM（亲和力成熟）

• 分选参数：FSC/SSC 设门 + 荧光强度排序

1.4 阳性克隆验证

• 测序成功率：≥95%（Sanger 测序）

• 亲和力测定：Biacore/Octet（可选）

四、应用场景

1. 治疗性抗体开发

• 肿瘤靶点（如 PD-L1、EGFR）

• 自身免疫病（如 TNF-α、IL-6）

2. 诊断试剂研发

• 病原体检测（新冠病毒 S 蛋白、HPV E6/E7）

• 肿瘤标志物（CEA、CA19-9）

3. 基础研究工具

• 蛋白互作解析（GPCRs、转录因子）

• 细胞信号通路调控

五、客户案例

• 技术参数：
  ▶ 文库类型：羊驼免疫文库（库容量 2×10⁷克隆）
  ▶ 筛选策略：3 轮 FACS（抗原浓度从 100 nM→10 pM）

• 成果：
  ▶ 获得 3 个高亲和力抗体（Kd<10 nM）
  ▶ 发表于Nature Biotechnology 2023, IF=68.16

• 挑战：膜蛋白低表达、构象不稳定

• 解决方案：
  ▶ 酵母表面展示 + 构象特异性抗原
  ▶ 获得 10 个膜定位抗体（流式验证阳性率 92%）

六、技术支持

• 免费分析：抗体序列 CDR 区预测 + 结构建模（基于 ColabFold）

• 验证服务：
  ▶ 抗体表达纯化（+15% 费用）
  ▶ 体内药效学研究（合作实验室支持）

• 质量承诺：每轮筛选富集倍数≥100 倍